上海恒遠吳經理與您一起探討ELISA樣本處理方法

通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步，下面就由上海恒遠生物科技有限公司吳簡單為您介紹一下不同類型的樣本的處理方法。

1、  血清

血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。

用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃放置一晚，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。

2、  血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。

3、  細胞培養上清

取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

4、  細胞裂解液

1）  吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。

2）  收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。

3）  加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。

4）  將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。

5）  4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

5、組織勻漿液

1）  將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質。

2）  將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分

3）  將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。（通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，檢測后計算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數）

4）  吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。

6、  尿液、唾液等其他液體生物樣本

1000×g離心20min，取上清即可檢測。

總的來說，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。

為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內檢測；4℃保存的樣本應在1周內進行檢測。

另外，還應保證樣本不含NaN₃，因為NaN₃會抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。