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ELISA法測(cè)定單克隆抗體的效價(jià)

  • 發(fā)布日期:2016-12-07      瀏覽次數(shù):879
    • ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上,形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原,稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后,作用于底物使之呈色,根據(jù)顏色的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。

       

      ELISA法是免疫酶技術(shù)的一種,其特點(diǎn)是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進(jìn)行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗滌,這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系,也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。在ELISA法中,酶促反應(yīng)只進(jìn)行一次,而抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進(jìn)行一次或數(shù)次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進(jìn)行免疫反應(yīng)。

       

      目前常用的幾種ELISA方法有:測(cè)定抗體的間接法,測(cè)定抗原的雙抗體夾心法和測(cè)定抗原的競(jìng)爭(zhēng)法等。本實(shí)驗(yàn)采用間接法測(cè)定單克隆抗體效價(jià)。其主要過程為:首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi),加待測(cè)抗體,保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì),加酶標(biāo)抗抗體,保溫后洗滌,加底物保溫30分鐘后,加酸或堿終止酶促反應(yīng),用目測(cè)或光電比色測(cè)定抗體含量。

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